Định lượng Triiodthyronine (T3) bằng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ

NGUYÊN LÝ

Nồng độ T3 trong huyết thanh người được định lượng bằng phương pháp miễn dịch phóng xạ cạnh tranh (competitive radioimmuno assay) sử dụng ống tráng sẵn kháng thể kháng T3. Trong khi ủ T3 trong mẫu xét nghiệm hoặc mẫu chuẩn cạnh tranh với kháng nguyên T3 đánh dấu để gắn với kháng thể kháng T3 gắn trên thành ống nghiệm.Hoạt độ gắn của T3 đánh dấu với kháng thể kháng T3 trên thành ống nghiệm tỷ lệ nghịch với nồng độ T3 trong mẫu xét nghiệm.

CHUẨN BỊ

Người thực hiện

Bác sỹ chuyên ngành Y học hạt nhân

Kỹ thuật viên xét nghiệm RIA

Kỹ sư, kỹ thuật viên vận hành thiết bị đo mẫu

Cán bộ hóa dược phóng xạ

Phương tiện, hoá chất

Phương tiện

2 máy đo Gamma Counter đo 125I và xử trí mẫu tự động theo chương trình .

2 máy lắc ngang ( 200-350 vòng/phút ,thường dùng 300 vòng/phút ),

2 máy trộn.

Một giá cắm bộ micropipet có số hút 20 μl , 200 μl , 1.000 μl và các hộp đựng đầu plastic các loại.

Giá cắm ống nghiệm .

Hoá chất:

RIA kit nhập của hãng.Thành phần kit gồm :

1(2) lọ tracer T– 125I, HT < 92 kBq/lọ , 10,5 ml.

1(2) lọ dung dịch đệm 95 ml

2 túi x 50 ống nghiệm tráng KT kháng T3 (thỏ).

Các lọ serum mẫu (standart) với các nồng độ T3 đã biết:0; 0,5; 0,8; 1,3;  2,0; 2,9; 4,5; 6,5; 10,0 ng/ml

02 ống chuẩn

CHỈ ĐỊNH

Tất cả các bệnh  liên quan đến tuyến giáp.

Lồi mắt không rõ nguyên nhân.

Nhịp tim nhanh không rõ nguyên nhân.

Cường giao cảm, tay run…

Sút cân không rõ nguyên nhân.

CHỐNG CHỈ ĐỊNH:

Không có.

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Lấy bệnh phẩm:

Người bệnh cần nhịn ăn sáng,được lấy 1-2 ml máu tĩnh mạch không chống đông.

Tiến hành kỹ thuật

Sau khi lấy mẫu máu, huyết thanh được tách bằng phương pháp thông thường. Tiến hành định lượng ngay hoặc bảo quản đến 24h ở 2-8oC. Thời gian bảo quản lâu hơn nên để ở -20 oC, thích hợp hơn là chia đều,tránh làm đông lặp đi lặp lại và tránh làm tan đông. Sau khi làm tan đông, mẫu huyêt thanh phải được trộn cẩn thận.

Quy trình định lượng T3

Đánh số đầy đủ các ống nghiệm (chuẩn, HTKT, mẫu). Tất cả các ống nghiệm trong một mẻ nên được xử trí giống nhau. Mỗi m  nên xây dựng một đường cong chuẩn mới.

100 μl chuẩn (hoặc mẫu của người bệnh) được nhỏ vào đáy các ống nghiệm phủ KT. Mỗi mẫu nên sử dụng một đầu pipet mới.

1.000 μl đệm ủ được thêm vào mỗi ống nghiệm.

Các ống nghiệm sau đó được lắc trên máy lắc ngang ở nhiệt độ phòng (1727oC).

Đổ, úp khô trên giấy thấm, các vết dịch dính vào thành ống nghiệm được rửa sạch.

1.000 μl dung dịch T3125I được nhỏ vào mỗi ống.

Như bước 4, ống nghiệm được lắc trong 1h.

Sau đó dung dịch được đổ, úp khô trên bề mặt thấm trong 2-5 phút. Rửa vết dịch dính vào thành ống nếu có.

Hoạt độ phóng xạ trong các ống nghiệm được đo trong 1 phút ở kênh 125I của máy đo gamma.

NHẬN ĐỊNH KẾT QUẢ

HTPX của tất cả các chuẩn từ S0– S6 được đo bằng xung/ phút (cpm), được đánh dấu dựa vào nồng độ T3 tương ứng trên đồ thị đã được chuẩn bị. Đường cong lý tưởng thu được bằng sự nối các điểm đó. Nếu chọn cách đánh giá bằng % liên kết B/T thì tổng hoạt độ T nên được xác định và số xung đo được được chia cho giá trị này. Giá trị trung bình của mỗi ca được lấy từ 2 giá trị đo của huyết thanh chuẩn hoặc của người bệnh và nồng độ T3 cần đo được đọc từ đường cong chuẩn.

Leave a reply

Please enter your comment!
Please enter your name here

spot_img