Định lượng Insulin bằng kỹ thuật miễn dịch phóng xạ

NGUYÊN LÝ

Định lượng Insulin bằng kỹ thuật IRMAlà kỹ thuật xét nghiệm miễn dịch phóng xạ không cạnh tranh bánh kẹp (sandwich IRMA)với nguyên lý sau: ủ kháng nguyên có trong mẫu thử với kháng thể đơn dòng kháng insulin bắt giữ đã gắn trên thành ống (bước 1), rửa loại bỏ các thành phần tự do không tham gia vào phản ứng kháng nguyên – kháng thể đơn dòng đặc hiệu; sau đó cho thêm kháng thể kháng insulin đơn dòng thứ hai có đánh dấu ¹²⁵I, ủ tiếp, rửa lần hai để loại bỏ các kháng thể đánh dấu ¹²⁵I tự do; Cuối cùng đếm hoạt độ phóng xạ trong ống nghiệm với thời gian 1 phút. Nồng độ kháng nguyên có trong mẫu thử tỉ lệ thuận với hoạt độ phóng xạ (cpm).

CHUẨN BỊ

Người thực hiện

Bác sỹ chuyên ngành Y học hạt nhân

Kỹ thuật viên xét nghiệm RIA

Kỹ sư , kỹ thuật viên vận hành thiết bị đo mẫu

Cán bộ hóa dược phóng xạ

Phương tiện, hoá chất

Phương tiện

Máy trộn (vortex type mixer), Máy lắc ngang (shaker) 200 – 350 rpm, thường dùng là 300 rpm, Máy đếm Gamma, Micropipette: 50μl,  100μl, Multipette: 200μl,  300 μl,  2000μl sai số ( ± 1%), Giá gắn ống nghiệm (tubes), Giấy thấm.

Hoá chất

Bộ kit định lượng Insulin gồm:

Kháng thể kháng Insulin đánh dấu ¹²⁵I: lọ 30ml, màu đỏ, hoạt độ phóng xạ: 460 KBq, trực dụng.

Mẫu chuẩn insulin: 06 lọ có thể tích 1mL, màu xanh với nồng độ từ 1 – 5 – 20 – 100 – 250 – 500 μIU/mL và 01 lọ 2 mL chuẩn có nồng độ 0.

01 lọ dung dịch tủa màu cam có thể tích 20 mL, trực dụng.

01 lọ huyết thanh insulin giám sát có dải nồng độ xác định, có thể tích: 1 mL, trực dụng.

01 lọ 25 mL dung dịch đệm dùng để rửa; trước khi sử dụng pha với 975mL nước cất hai lần.

100 ống nghiệm có gắn kháng thể kháng insuline đơn dòng trong thành ống, trực dụng.

CHỈ ĐỊNH

Người bệnh có bệnh lý tiểu đường.

U tụy

CHỐNG CHỈ ĐỊNH:

Không có.

CÁC BƯỚC TIẾN HÀNH

Đưa thuốc thử và mẫu bệnh phẩm ra nhiệt độ phòng (18-25⁰C) tối thiểu 30’ trước khi dùng.

Đánh số kép lên các ống nghiệm (Total, Chuẩn (Standards – St), huyết thanh giám sát (Control serum – CS), bệnh phẩm – P).